Merci fir Äre Besuch op Nature.com. D'Browserversioun, déi Dir benotzt, ënnerstëtzt CSS limitéiert. Fir déi bescht Erfahrung empfeelen mir Iech, en aktualiséierte Browser ze benotzen (oder de Kompatibilitéitsmodus am Internet Explorer auszeschalten). An der Zwëschenzäit, fir weider Ënnerstëtzung ze garantéieren, wäerte mir d'Websäit ouni Stiler a JavaScript uweisen.
Insulin-Nanopartikelen (NPs) mat engem héijen Undeel u Ladekapazitéit hunn ënnerschiddlech Uwendungen a verschiddenen Doséierungsformen fonnt. Dës Aarbecht zielt drop of, den Effekt vu Gefriertrocknungs- a Sprëtzdrocknungsprozesser op d'Struktur vun Insulin-belaaschte Chitosan-Nanopartikelen ze evaluéieren, mat oder ouni Mannitol als Kryoprotector. Mir hunn och d'Qualitéit vun dësen Nanopartikelen bewäert andeems mir se nei opgeléist hunn. Virun der Dehydratioun gouf d'Partikelgréisst vun de Chitosan/Natriumtripolyphosphat/Insulin-vernetzte Nanopartikelen op 318 nm optimiséiert, de PDI war 0,18, d'Kapsulatiounseffizienz war 99,4% an d'Ladekapazitéit war 25,01%. No der Rekonstitutioun hunn all Nanopartikelen, ausser déi, déi duerch eng Gefriertrocknungsmethod ouni d'Benotzung vu Mannitol produzéiert goufen, hir sphäresch Partikelstruktur behalen. Am Verglach mat Mannitol-haltege Nanopartikelen, déi entweder duerch Sprëtzen dehydratéiert goufen, hunn déi mannitolfräi sprëtzgedréchent Nanopartikelen och déi klengst duerchschnëttlech Partikelgréisst (376 nm) an den héchsten Undeel u Ladekapazitéit gewisen. (25,02%) mat enger ähnlecher Kapselungsquote (98,7%) an PDI (0,20) duerch Trocknungs- oder Gefriertrocknungstechniken. Déi gedréchent Nanopartikelen duerch Sprëtztrocknung ouni Mannitol hunn och zu der schnellster Fräisetzung vun Insulin an der héchster Effizienz vun der zellularer Opnam gefouert. Dës Aarbecht weist, datt Sprëtztrocknung Insulin-Nanopartikelen ouni de Besoin fir Kryoprotektiven am Verglach mat konventionelle Gefriertrocknungsmethoden dehydréiere kann, wat eng méi grouss Ladekapazitéit, e méi niddrege Bedarf un Zousätz a wesentleche Betribskäschten erstellt.
Zënter senger Entdeckung am Joer 19221,2,3 hunn Insulin a seng pharmazeutesch Präparater d'Liewe vu Patienten mat Typ-1-Diabetis (T1DM) an Typ-2-Diabetis (T1DM) gerett. Wéinst senge Eegeschafte als Protein mat héijem Molekulargewiicht gëtt Insulin awer liicht aggregéiert, duerch proteolytesch Enzymer ofgebrach an duerch den First-Pass-Effekt eliminéiert. Leit, déi mat Typ-1-Diabetis diagnostizéiert goufen, brauche fir de Rescht vun hirem Liewen Insulininjektiounen. Vill Patienten, déi ufanks mat Typ-2-Diabetis diagnostizéiert goufen, brauche och laangfristeg Insulininjektiounen. Deeglech Insulininjektioune si fir dës Persounen eng eescht Quell vu deegleche Péng an Onbequemlechkeet, mat negativen Auswierkungen op d'mental Gesondheet. Dofir ginn aner Forme vun der Insulinverabreichung, déi manner Onbequemlechkeet verursaachen, wéi z. B. oral Insulinverabreichung, extensiv ënnersicht5, well se de Potenzial hunn, d'Liewensqualitéit vu ronn 5 Milliarde Leit mat Diabetis weltwäit erëm hierzestellen.
D'Nanopartikeltechnologie huet e bedeitende Fortschrëtt bei de Versich bruecht, oral Insulin ze huelen4,6,7. Ee Prozess, deen den Insulin effektiv verkapselt a virum Ofbau schützt, fir eng gezielt Liwwerung op spezifesch Kierperplazen. Wéi och ëmmer, d'Benotzung vu Nanopartikelformuléierungen huet verschidde Limitatiounen, haaptsächlech wéinst Stabilitéitsproblemer vu Partikelsuspensioune. Wärend der Lagerung kann eng gewëssen Aggregatioun optrieden, wat d'Bioverfügbarkeet vun Insulin-belaaschte Nanopartikelen8 reduzéiert. Zousätzlech muss och d'chemesch Stabilitéit vun der Polymermatrix vun Nanopartikelen an Insulin berécksiichtegt ginn, fir d'Stabilitéit vun Insulin-Nanopartikelen (NPs) ze garantéieren. Aktuell ass d'Gefriertrocknungstechnologie de Goldstandard fir stabil NPs ze kreéieren an ongewollt Ännerungen während der Lagerung9 ze vermeiden.
Wéi och ëmmer, Gefriertrocknung erfuerdert d'Zousätzlech vu Kryoprotektiven, fir ze verhënneren datt déi sphäresch Struktur vun den NPs duerch d'mechanesch Belaaschtung vun Äiskristaller beaflosst gëtt. Dëst reduzéiert d'Belaaschtung vun Insulin-Nanopartikelen no der Lyophiliséierung däitlech, well de Kryoprotektiv de gréissten Deel vum Gewiichtsverhältnis anhëlt. Dofir sinn déi produzéiert Insulin-NPs dacks net gëeegent fir d'Produktioun vun dréchene Pulverformuléierungen, wéi zum Beispill oral Tabletten a oral Filmer, well grouss Quantitéiten un dréchenen Nanopartikelen gebraucht ginn, fir dat therapeutescht Fënster vum Insulin z'erreechen.
Sprëtztrocknung ass e bekannten an net deier Prozess op industriellem Niveau fir d'Produktioun vun dréchene Pulver aus flëssege Phasen an der Pharmaindustrie10,11. D'Kontroll iwwer de Partikelbildungsprozess erméiglecht eng korrekt Kapselung vu verschiddene bioaktive Verbindungen12, 13. Ausserdeem ass et zu enger effektiver Technik fir d'Virbereedung vun agekapselte Proteinen fir d'oral Verwaltung ginn. Wärend dem Sprëtztrocknung verdampft d'Waasser ganz séier, wat hëlleft d'Temperatur vum Partikelkär niddreg ze halen11,14, wat seng Uwendung fir d'Verkapselung vun hëtzeempfindleche Komponenten erméiglecht. Virum Sprëtztrocknung soll d'Beschichtungsmaterial grëndlech mat der Léisung homogeniséiert ginn, déi déi agekapselt Zutaten enthält11,14. Am Géigesaz zum Gefriertrocknung verbessert d'Homogeniséierung virun der Kapselung beim Sprëtztrocknung d'Kapselungseffizienz während der Dehydratioun. Well de Sprëtztrocknungs-Verkapselungsprozess keng Kryoprotektiven erfuerdert, kann d'Sprëtztrocknung benotzt ginn fir gedréchent NPs mat engem héijen Undeel un Ladung ze produzéieren.
Dës Studie bericht iwwer d'Produktioun vun Insulin-belaaschte Nanopartikelen duerch Vernetzung vu Chitosan an Natriumtripolyphosphat mat Hëllef vun enger Ionengelmethod. Ionengelatioun ass eng Virbereedungsmethod, déi d'Produktioun vun Nanopartikelen duerch elektrostatesch Interaktiounen tëscht zwou oder méi ioneschen Aarten ënner bestëmmte Konditiounen erlaabt. Souwuel Gefriertrocknungs- wéi och Sprëtzrocknungstechnike goufen benotzt fir déi optiméiert Chitosan/Natriumtripolyphosphat/Insulin-vernetzte Nanopartikelen ze dehydratiséieren. No der Dehydratioun gouf hir Morphologie duerch SEM analyséiert. Hir Rekombinatiounsfäegkeet gouf evaluéiert andeems hir Gréisstverdeelung, Uewerflächenladung, PDI, Kapsulatiounseffizienz an Ladungsgehalt gemooss goufen. D'Qualitéit vun de resolubiliséierten Nanopartikelen, déi duerch verschidden Dehydratiounsmethoden produzéiert goufen, gouf och evaluéiert andeems hiren Insulinschutz, Fräisetzungsverhalen an zellulär Opnahmeffizienz verglach goufen.
De pH-Wäert vun der gemëschter Léisung an de Verhältnes vu Chitosan an Insulin sinn zwee Schlësselfaktoren, déi d'Partikelgréisst an d'Enkapsulatiounseffizienz (EE) vun den endgültegen NPs beaflossen, well se direkt den ionotrope Gelierungsprozess beaflossen. De pH-Wäert vun der gemëschter Léisung huet sech als staark korreléiert mat der Partikelgréisst an der Enkapsulatiounseffizienz gewisen (Fig. 1a). Wéi an der Fig. 1a gewisen, ass déi duerchschnëttlech Partikelgréisst (nm) erofgaang, wéi de pH-Wäert vun 4,0 op 6,0 eropgaang ass, an den EE ass däitlech eropgaang, während déi duerchschnëttlech Partikelgréisst, wéi de pH-Wäert op 6,5 eropgaang ass, ugefaangen huet eropzegoen an den EE onverännert bliwwen ass. Wéi de Verhältnes vu Chitosan zu Insulin eropgeet, klëmmt och déi duerchschnëttlech Partikelgréisst. Ausserdeem gouf keng Ännerung vum EE observéiert, wann Nanopartikelen an engem Masseverhältnes vu Chitosan/Insulin méi héich wéi 2,5:1 (w/w) virbereet goufen (Fig. 1b). Dofir goufen déi optimal Virbereedungsbedingungen an dëser Studie (pH 6,0, Chitosan/Insulin Masseverhältnes vun 2,5:1) benotzt. fir Insulin-belaaschte Nanopartikel fir weider Studien virzebereeden. Ënner dëse Virbereedungsbedingungen gouf déi duerchschnëttlech Partikelgréisst vun den Insulin-Nanopartikelen op 318 nm optimiséiert (Fig. 1c), de PDI war 0,18, d'Ambeddingseffizienz war 99,4%, de Zeta-Potenzial war 9,8 mV an d'Insulinbelaaschtung war 25,01% (m/m). Baséierend op de Resultater vun der Transmissiounselektronemikroskopie (TEM) waren déi optiméiert Nanopartikel ongeféier sphäresch an diskret mat relativ gläichméisseger Gréisst (Fig. 1d).
Parameteroptimiséierung vun Insulin-Nanopartikelen: (a) den Effekt vum pH-Wäert op den duerchschnëttlechen Duerchmiesser an d'Enkapsulatiounseffizienz (EE) vun Insulin-Nanopartikelen (virbereet mat engem Masseverhältnis vu Chitosan an Insulin vun 5:1); (b) Chitosan an Afloss vum Masseverhältnis vun Insulin op den duerchschnëttlechen Duerchmiesser an d'Enkapsulatiounseffizienz (EE) vun Insulin-NPs (virbereet bei pH 6); (c) Partikelgréisstverdeelung vun optiméierten Insulin-Nanopartikelen; (d) TEM-Mikrographie vun optiméierten Insulin-NPs.
Et ass bekannt, datt Chitosan e schwaache Polyelektrolyt mat engem pKa vu 6,5 ass. Et ass a sauerem Medium positiv gelueden, well seng Haaptaminogrupp duerch Waasserstoffionen protonéiert gëtt15. Dofir gëtt et dacks als Träger benotzt fir negativ geluede Makromoleküle ze verkapselen. An dëser Studie gouf Chitosan benotzt fir Insulin mat engem isoelektresche Punkt vu 5,3 ze verkapselen. Well Chitosan als Beschichtungsmaterial benotzt gëtt, klëmmt d'Déckt vun der baussenzeger Schicht vun den Nanopartikelen entspriechend mat der Erhéijung vu sengem Undeel, wat zu enger méi grousser duerchschnëttlecher Partikelgréisst féiert. Zousätzlech kënnen méi héich Chitosanniveauen méi Insulin verkapselen. An eisem Fall war d'EE am héchsten, wann de Verhältnis vu Chitosan an Insulin 2,5:1 erreecht huet, an et gouf keng bedeitend Ännerung vun der EE, wann de Verhältnis weider eropgaangen ass.
Nieft dem Verhältnes vu Chitosan an Insulin huet de pH-Wäert och eng entscheedend Roll bei der Virbereedung vun NPs gespillt. Gan et al. 17 hunn den Effekt vum pH-Wäert op d'Partikelgréisst vun Chitosan-Nanopartikelen ënnersicht. Si hunn eng kontinuéierlech Ofsenkung vun der Partikelgréisst festgestallt, bis de pH-Wäert 6,0 erreecht huet, an eng bedeitend Erhéijung vun der Partikelgréisst gouf bei pH > 6,0 observéiert, wat mat eisen Observatioune konsequent ass. Dëst Phänomen ass doduerch bedingt, datt mam eropgoende pH-Wäert den Insulinmolekül eng negativ Uewerflächenladung kritt, wat elektrostatesch Interaktioune mam Chitosan/Natriumtripolyphosphat (TPP)-Komplex favoriséiert, wat zu enger klenger Partikelgréisst an engem héijen EE féiert. Wéi de pH-Wäert awer op 6,5 ugepasst gouf, goufen d'Aminogruppen um Chitosan deprotonéiert, wat zu enger Chitosan-Faltung gefouert huet. Dofir féiert en héije pH-Wäert zu manner Belaaschtung vun Aminoionen un TPP an Insulin, wat zu enger méi niddreger Vernetzung, enger méi grousser duerchschnëttlecher Partikelgréisst an engem méi niddregen EE féiert.
D'Analyse vun de morphologeschen Eegeschafte vu gefriergedréchenten a sprëtzgedréchenten NPs kann d'Auswiel vu bessere Dehydratiouns- a Pulverbildungstechniken guidéieren. Déi bevorzugt Method soll Medikamentenstabilitéit, eenheetlech Partikelform, héich Medikamentenbelaaschtung a gutt Léislechkeet an der ursprénglecher Léisung ubidden. An dëser Studie goufen, fir déi zwou Techniken besser ze vergläichen, Insulin-NPs mat oder ouni 1% Mannitol während der Dehydratioun benotzt. Mannitol gëtt als Füllmëttel oder Kryoprotektiv a verschiddenen dréchene Pulverformuléierungen fir Gefriertrocknung a Sprëtzdrocknung benotzt. Fir déi lyophiliséiert Insulin-Nanopartikelen ouni Mannitol, wéi an der Figur 2a gewisen, gouf eng héich poréis Pulverstruktur mat groussen, onregelméissegen a raue Flächen ënner Rasterelektronenmikroskopie (SEM) observéiert. Wéineg diskret Partikelen goufen am Pulver no der Dehydratioun festgestallt (Fig. 2e). Dës Resultater weisen datt déi meescht NPs während dem Gefriertrocknung ouni Kryoprotektiv ofgebaut goufen. Fir gefriergedréchent a sprëtzgedréchent Insulin-Nanopartikelen, déi 1% Mannitol enthalen, goufen sphäresch Nanopartikelen mat glaten Flächen observéiert (Fig. 2b, d, f, h). Insulin Nanopartikelen, déi ouni Mannitol spraygedréchent goufen, sinn kugelfërmeg bliwwen, awer op der Uewerfläch zerknittert (Fig. 2c). Kugelfërmeg a zerknittert Uewerfläche ginn an den Tester vum Fräisetzungsverhalen an den zellulären Opnahme weider diskutéiert. Baséierend op dem siichtbare Erscheinungsbild vun den gedréchenten NPs hunn souwuel spraygedréchent NPs ouni Mannitol wéi och NPs, déi gefriergedréchent a mat Mannitol spraygedréchent goufen, fein NP-Pulver erginn (Fig. 2f, g, h). Wat méi grouss d'Uewerfläch tëscht de Partikeluewerflächen ass, wat méi héich d'Léislechkeet an dofir méi héich d'Fräisetzungsquote.
Morphologie vun ënnerschiddlechen dehydratiséierten Insulin-NPs: (a) SEM-Bild vu lyophiliséierten Insulin-NPs ouni Mannitol; (b) SEM-Bild vu lyophiliséierten Insulin-NPs mat Mannitol; (c) spraygedréchent Insulin-NPs ouni Mannitol SEM-Bild vun ; (d) SEM-Bild vun Insulin-NPs, déi mat Mannitol spraygedréchent sinn; (e) Bild vu lyophiliséierten Insulin-NPs-Pulver ouni Mannitol; (f) Bild vu lyophiliséierten Insulin-NPs mat Mannitol; (g) Bild vu spraygedréchenten Insulin-NPs-Pulver ouni Mannitol; (h) Bild vu spraygedréchenten Insulin-NPs-Pulver mat Mannitol.
Beim Gefriertrocknen wierkt Mannitol als Kryoprotektiv, andeems et d'NPs an enger amorpher Form hält a Schied duerch Äiskristaller verhënnert19. Am Géigesaz dozou gëtt et kee Gefrierschratt beim Sprëtztrocknen. Dofir ass Mannitol bei dëser Method net erfuerderlech. Tatsächlech hunn sprëtztrocknend NPs ouni Mannitol méi fein NPs geliwwert, wéi virdru beschriwwen. Mannitol kann awer ëmmer nach als Fëllstoff am Sprëtztrocknungsprozess déngen, fir den NPs eng méi sphäresch Struktur20 ze ginn (Fig. 2d), wat hëlleft, en eenheetlecht Fräisetzungsverhalen vun esou agekapselten NPs ze kréien. Zousätzlech ass et kloer, datt e puer grouss Partikelen souwuel a gefriertrocknenden wéi och a sprëtztrocknenden Insulin-NPs, déi Mannitol enthalen, nogewise kënne ginn (Fig. 2b,d), wat op d'Akkumulatioun vu Mannitol am Partikelkär zesumme mam agekapselten Insulin zréckzeféiere kéint sinn. Zu der Chitosan-Schicht. Et ass derwäert ze bemierken, datt an dëser Studie, fir sécherzestellen, datt déi sphäresch Struktur no der Dehydratioun intakt bleift, d'Verhältnes vu Mannitol a Chitosan op 5:1 gehale gëtt, sou datt eng grouss Quantitéit u Fëllstoff och d'Partikelgréisst vun den gedréchenten NPs vergréissere kann.
Fourier-Transformatiounsinfrarout-ofgeschwächt Totalreflexiounsspektroskopie (FTIR-ATR) charakteriséiert déi physikalesch Mëschung aus fräiem Insulin, Chitosan, Chitosan, TPP an Insulin. All dehydratiséiert NPs goufen duerch FTIR-ATR-Spektroskopie charakteriséiert. Besonnesch Bandintensitéiten vun 1641, 1543 an 1412 cm-1 goufen an enkapselten NPs observéiert, déi mat Mannitol gefriergedréchent goufen, an an NPs, déi mat an ouni Mannitol spraygedréchent goufen (Fig. 3). Wéi virdru bericht, waren dës Erhéijunge vun der Stäerkt mat der Vernetzung tëscht Chitosan, TPP an Insulin assoziéiert. D'Untersuchung vun der Interaktioun tëscht Chitosan an Insulin huet gewisen, datt an den FTIR-Spektre vun Insulin-belaaschte Chitosan-Nanopartikelen d'Chitosanband mat där vum Insulin iwwerlappt huet, wouduerch d'Carbonylintensitéit (1641 cm-1) an den Amin (1543 cm-1) Band eropgaange sinn. D'Tripolyphosphatgruppen vun TPP sinn mat Ammoniumgruppen am Chitosan verbonnen a bilden eng Band bei ... 1412 cm-1.
FTIR-ATR Spektre vu fräiem Insulin, Chitosan, physikalesche Mëschunge vu Chitosan/TPP/Insulin an NPs, déi duerch verschidde Methoden dehydratéiert goufen.
Ausserdeem stëmmen dës Resultater mat deene vum SEM iwwereneen, déi gewisen hunn, datt déi agekapselt NPs intakt bliwwe sinn, souwuel beim Sprëtzen wéi och beim Gefriergedréchent mat Mannitol, awer ouni Mannitol huet nëmmen d'Sprëtzdréchnung agekapselt Partikelen produzéiert. Am Géigesaz dozou waren d'FTIR-ATR Spektralresultater vun NPs, déi ouni Mannitol gefriergedréchent goufen, ganz ähnlech wéi d'physikalesch Mëschung aus Chitosan, TPP an Insulin. Dëst Resultat weist drop hin, datt d'Vernetzungen tëscht Chitosan, TPP an Insulin net méi an NPs präsent sinn, déi ouni Mannitol gefriergedréchent goufen. D'NP-Struktur gouf beim Gefrierdréchnen ouni Kryoprotector zerstéiert, wat an de SEM-Resultater ze gesi ass (Fig. 2a). Baséierend op der Morphologie an den FTIR-Resultater vun dehydratiséierten Insulin-NPs goufen nëmme lyophiliséiert, sprëtzgedréchent a mannitolfräi NPs fir Rekonstitutiounsexperimenter benotzt, an nëmme mannitolfräi NPs wéinst der Zersetzung vu mannitolfräien NPs während der Dehydratioun.
D'Dehydratioun gëtt fir laangfristeg Lagerung a fir d'Wiederveraarbechtung an aner Formuléierungen benotzt. D'Fäegkeet vun dréchenen NPs sech no der Lagerung ze rekonstituéieren ass entscheedend fir hir Notzung a verschiddene Formuléierungen wéi Tabletten a Filmer. Mir hunn festgestallt, datt déi duerchschnëttlech Partikelgréisst vun den sprëtzgedréchenten Insulin-NPs ouni Mannitol no der Rekonstitutioun nëmme liicht zougeholl huet. Op der anerer Säit ass d'Partikelgréisst vun den sprëtzgedréchenten an gefriergedréchenten Insulin-Nanopartikelen mat Mannitol däitlech eropgaang (Tabell 1). PDI an EE hunn sech net signifikant geännert (p > 0,05) no der Rekombinatioun vun allen NPs an dëser Studie (Tabell 1). Dëst Resultat weist datt déi meescht Partikelen no der Opléisung intakt bliwwe sinn. Wéi och ëmmer, d'Zousätzlech vu Mannitol huet zu enger staark reduzéierter Insulinbelaaschtung vu lyophiliséierten a sprëtzgedréchenten Mannitol-Nanopartikelen gefouert (Tabell 1). Am Géigesaz dozou ass den Insulinbelaaschtungsgehalt vun NPs, déi ouni Mannitol sprëtzgedréchent goufen, d'selwecht bliwwen wéi virdrun (Tabell 1).
Et ass bekannt, datt d'Beluedung vun Nanopartikelen entscheedend ass, wann se fir d'Liwwerung vu Medikamenter benotzt ginn. Fir NPs mat gerénger Belaaschtung sinn ganz grouss Quantitéiten u Material erfuerderlech, fir den therapeutesche Schwellwäert z'erreechen. Wéi och ëmmer, déi héich Viskositéit vun esou héijen NP-Konzentratioune féiert zu Onbequemlechkeeten a Schwieregkeeten bei der oraler Verwaltung respektiv injizéierbarer Formuléierung 22. Zousätzlech kënnen Insulin-NPs och benotzt ginn, fir Tabletten a viskos Biofilmer ze maachen 23, 24, wat d'Benotzung vu grousse Quantitéiten un NPs bei gerénger Belaaschtungsniveauen erfuerdert, wat zu groussen Tabletten a décken Biofilmer féiert, déi net fir oral Uwendungen gëeegent sinn. Dofir sinn dehydréiert NPs mat héijer Insulinbelaaschtung héich erwënscht. Eis Resultater suggeréieren, datt déi héich Insulinbelaaschtung vu Mannitol-fräien, spraygedréchenten NPs vill attraktiv Virdeeler fir dës alternativ Liwwermethoden ubidden kann.
All dehydratiséiert NPs goufen dräi Méint am Frigo gelagert. SEM-Resultater hunn gewisen, datt d'Morphologie vun alle dehydratiséierten NPs während der dräi Méint laanger Lagerung net wesentlech geännert huet (Fig. 4). No der Rekonstitutioun a Waasser hunn all NPs e liichte Réckgang vun der EE gewisen an ongeféier eng kleng Quantitéit (~5%) Insulin während der dräi Méint laanger Lagerung fräigesat (Tabell 2). Wéi och ëmmer, déi duerchschnëttlech Partikelgréisst vun alle Nanopartikelen ass eropgaang. D'Partikelgréisst vun NPs, déi ouni Mannitol gesprëtzt gedréchent goufen, ass op 525 nm eropgaang, während déi vun de gesprëtzt gedréchenten a gefriergedréchenten NPs mat Mannitol op 872 respektiv 921 nm eropgaang ass (Tabell 2).
Morphologie vun ënnerschiddlechen dehydratiséierten Insulin-Nanopartikelen, déi dräi Méint laang gelagert goufen: (a) SEM-Bild vu lyophiliséierten Insulin-Nanopartikelen mat Mannitol; (b) SEM-Bild vu spraygedréchenten Insulin-Nanopartikelen ouni Mannitol; (c) ouni Mannitol SEM-Biller vu spraygedréchenten Insulin-Nanopartikelen.
Ausserdeem goufen Nidderschléi an de rekonstituéierten Insulin-Nanopartikelen observéiert, déi mat Mannitol gesprëtzt a gefriergedréchent goufen (Fig. S2). Dëst kéint doduerch verursaacht ginn, datt grouss Partikelen net richteg am Waasser suspendéiert sinn. All déi uewe genannten Resultater weisen, datt d'Sprëtztrocknungstechnik Insulin-Nanopartikelen virun Dehydratioun schütze kann an datt héich Quantitéiten un Insulin-Nanopartikelen ouni Fëllstoffer oder Kryoprotektiven erreecht kënne ginn.
D'Insulinretention gouf an engem pH-Medium vun 2,5 mat Pepsin, Trypsin an α-Chymotrypsin getest, fir d'Schutzfäegkeet vun den NPs géint enzymatesch Verdauung no Dehydratioun ze demonstréieren. D'Insulinretention vun dehydratéierten NPs gouf mat där vu frësch preparéierten NPs verglach, a fräit Insulin gouf als negativ Kontroll benotzt. An dëser Studie huet fräit Insulin eng séier Insulineliminatioun bannent 4 Stonnen an allen dräi enzymateschen Behandlungen gewisen (Fig. 5a-c). Am Géigesaz dozou huet den Insulineliminatiounstest vu mat Mannitol gefriergedréchenten NPs an NPs, déi mat oder ouni Mannitol spraygedréchent goufen, e wesentlech méi héije Schutz vun dësen NPs géint enzymatesch Verdauung gewisen, wat ähnlech wéi dee vu frësch preparéierten Insulin-NPs war (Figur 1).5a-c). Mat Hëllef vun Nanopartikelen a Pepsin, Trypsin an α-Chymotrypsin konnten méi wéi 50%, 60% respektiv 75% vum Insulin bannent 4 Stonnen geschützt ginn (Fig. 5a-c). Dës Insulin-Schutzfäegkeet kéint d'Chance op eng méi héich Insulinabsorptioun erhéijen. an de Bluttkreeslaf25. Dës Resultater suggeréieren, datt d'Spraydréchnung mat oder ouni Mannitol an d'Gefriertréchnung mat Mannitol d'Insulin-schützend Fäegkeet vun den NPs no Dehydratioun erhale kënnen.
Schutz- a Fräisetzungsverhalen vun dehydratéierten Insulin-NPs: (a) Schutz vum Insulin an enger Pepsin-Léisung; (b) Schutz vum Insulin an enger Trypsin-Léisung; (c) Schutz vum Insulin duerch eng α-Chymotrypsin-Léisung; (d) D'Fräisetzungsverhalen vun dehydratéierten NPs an enger Léisung mat engem pH-Wäert vun 2,5; (e) d'Fräisetzungsverhalen vun dehydratéierten NPs an enger Léisung mat engem pH-Wäert vun 6,6; (f) d'Fräisetzungsverhalen vun dehydratéierten NPs an enger Léisung mat engem pH-Wäert vun 7,0.
Frësch preparéiert an rekonstituéiert dréchen Insulin-NPs goufen a verschiddene Pufferen (pH = 2,5, 6,6, 7,0) bei 37 °C inkubéiert, wouduerch de pH-Wäert vum Mo, dem Zwölffingerdarm an dem ieweschten Dünndarm simuléiert gouf, fir den Effekt vum Insulin op d'Insulinresistenz z'ënnersichen. Fräisetzungsverhalen a verschiddenen Ëmfeld. Fragment vum Magen-Darm-Trakt. Bei pH = 2,5 hunn Insulin-belaaschte NPs an nei opgeléist dréchen Insulin-NPs eng initial Explosiounsfräisetzung bannent der éischter Stonn gewisen, gefollegt vun enger lueser Fräisetzung iwwer déi nächst 5 Stonnen (Fig. 5d). Dës séier Fräisetzung um Ufank ass héchstwahrscheinlech d'Resultat vun enger schneller Uewerflächendesorptioun vu Proteinmoleküle, déi net komplett an der interner Struktur vum Partikel immobiliséiert sinn. Bei pH = 6,5 hunn Insulin-belaaschte NPs an rekonstituéiert dréchen Insulin-NPs eng glat a lues Fräisetzung iwwer 6 Stonnen gewisen, well de pH vun der Testléisung ähnlech wéi dee vun der mat NPs virbereeter Léisung war (Fig. 5e). Bei pH = 7 waren d'NPs onstabil a bal komplett bannent den éischten zwou Stonnen ofgebaut (Fig. 5f). Dëst ass well d'Deprotonatioun vu Chitosan bei méi héije pH geschitt, wat zu engem manner kompakten Polymernetz an enger Fräisetzung vu beliichtem Insulin féiert.
Ausserdeem hunn déi ouni Mannitol spraygedréchent Insulin-NPs e méi séiere Fräisetzungsprofil gewisen ewéi déi aner dehydratéiert NPs (Fig. 5d-f). Wéi virdru beschriwwen, hunn déi rekonstituéiert Insulin-NPs, déi ouni Mannitol gedréchent goufen, déi klengst Partikelgréisst gewisen. Kleng Partikelen bidden eng méi grouss Uewerfläch, sou datt de gréissten Deel vum relevante Medikament op oder no bei der Partikeluewerfläch ass, wat zu enger schneller Medikamentenfräisetzung féiert26.
D'Zytotoxizitéit vun den NPs gouf mam MTT-Assay ënnersicht. Wéi an der Figur S4 gewisen, gouf festgestallt, datt all dehydratéiert NPs keen signifikanten Effekt op d'Zellviabilitéit bei Konzentratioune vu 50–500 μg/ml haten, wat drop hiweist, datt all dehydratéiert NPs sécher kënne benotzt ginn, fir d'therapeutesch Fënster z'erreechen.
D'Liewer ass dat Haaptorgan, duerch dat den Insulin seng physiologesch Funktiounen ausübt. HepG2-Zellen sinn eng mënschlech Hepatomzell-Linn, déi dacks als In-vitro-Hepatozyten-Opnahmemodell benotzt gëtt. Hei goufen HepG2-Zellen benotzt fir d'zellulär Opnahm vun dehydratéierten NPs mat Gefriertrocknungs- a Sprëtzdrocknungsmethoden ze bewäerten. Zellulär Opnahm duerch konfokal Laserscanning mat Flowzytometrie a Visioun no e puer Stonne Inkubatioun mat fräiem FITC-Insulin bei enger Konzentratioun vun 25 μg/mL, frësch preparéiert FITC-Insulin-belaaschte NPs an dehydratéiert FITC-Insulin-belaaschte NPs bei gläichen Insulinkonzentratiounen. Quantitativ Mikroskopie (CLSM) Observatioune goufen duerchgefouert. Lyophiliséiert NPs ouni Mannitol goufen während der Dehydratioun zerstéiert a goufen an dësem Test net evaluéiert. Déi intrazellulär Fluoreszenzintensitéiten vu frësch preparéierten Insulin-belaaschte NPs, lyophiliséierten NPs mat Mannitol a sprëtzgedréchenten NPs mat an ouni Mannitol (Fig. 6a) waren 4,3, 2,6, 2,4 an 4,1 Mol méi héich wéi déi fräi. FITC-Insulin Grupp, jeeweileg (Fig. 6b). Dës Resultater suggeréieren, datt encapsuléiert Insulin méi staark an der zellularer Opnam ass wéi fräit Insulin, haaptsächlech wéinst der méi klenger Gréisst vun den insulinbelaaschte Nanopartikelen, déi an der Studie produzéiert goufen.
HepG2-Zellopnahm no 4 Stonnen Inkubatioun mat frësch preparéierten NPs an dehydratiséierten NPs: (a) Verdeelung vun der FITC-Insulinopnahm duerch HepG2-Zellen. (b) Geometresche Mëttelwäert vun de Flusenzintensitéiten, analyséiert duerch Flusszytometrie (n = 3), *P < 0,05 am Verglach mat fräiem Insulin.
Och d'CLSM-Biller hunn gewisen, datt d'FITC-Fluoreszenzintensitéiten vun frësch preparéierten FITC-Insulin-belaaschte NPs an FITC-Insulin-belaaschte spraygedréchenten NPs (ouni Mannitol) vill méi staark waren wéi déi vun den anere Proben (Fig. 6a). Ausserdeem huet déi méi héich Viskositéit vun der Léisung mat der Zousaz vu Mannitol d'Resistenz géint d'zellulär Opnam erhéicht, wat zu enger reduzéierter Insulinproliferatioun gefouert huet. Dës Resultater suggeréieren, datt mannitolfräi spraygedréchent NPs déi héchst zellulär Opnameffizienz gewisen hunn, well hir Partikelgréisst méi kleng war wéi déi vun gefriergedréchenten NPs no der Opléisung.
Chitosan (duerchschnëttlecht Molekulargewiicht 100 KDa, 75–85% deacetyléiert) gouf vu Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, Kanada) kaaft. Natriumtripolyphosphat (TPP) gouf vu VWR (Radnor, Pennsylvania, USA) kaaft. Rekombinant mënschlecht Insulin, dat an dëser Studie benotzt gouf, war vu Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). Mat Fluorescein-Isothiocyanat (FITC) markéiert mënschlecht Insulin a 4′,6-Diamidino-2-phenylindol-Dihydrochlorid (DAPI) goufe vu Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, Kanada) kaaft. D'HepG2-Zelllinn gouf vun ATCC (Manassas, Virginia, USA) kritt. All aner Reagenzien ware vun analytescher oder chromatographescher Qualitéit.
Bereet eng 1 mg/ml CS-Léisung vir, andeems Dir se an duebel destilléiertem Waasser (DD-Waasser) mat 0,1% Essigsäure opléist. Bereet 1 mg/ml Léisunge vun TPP an Insulin vir, andeems Dir se an DD-Waasser respektiv 0,1% Essigsäure opléist. D'Viremulsioun gouf mat engem Polytron PCU-2-110 High-Speed-Homogenisator (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA) virbereet. De Virbereedungsprozess ass wéi follegt: als éischt ginn 2 ml TPP-Léisung zu 4 ml Insulinléisung bäigefüügt, an d'Mëschung gëtt 30 Minutte geréiert a komplett vermëscht. Duerno gouf déi gemëscht Léisung tropfenweis duerch eng Sprëtz ënner héijer Geschwindegkeet (10.000 rpm) an d'CS-Léisung bäigefüügt. D'Mëschunge goufen 30 Minutte laang an engem Äisbad ënner héijer Geschwindegkeet (15.000 rpm) gehalen, an si goufen op e bestëmmte pH-Wäert ugepasst, fir vernetzt Insulin-NPs ze kréien. Fir d'Insulin-NPs weider ze homogeniséieren an d'Partikelgréisst ze reduzéieren, goufen se fir eng ... sonikéiert. weider 30 Minutten an engem Äisbad mat engem Sonde-Sonicator (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Däitschland).
Insulin-NPS goufen op Z-duerchschnëttlechen Duerchmiesser, Polydispersitéitsindex (PDI) a Zeta-Potenzial mat Hëllef vun dynamesche Liichtstreuungsmiessungen (DLS) mat engem Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Éisträich) getest, andeems se an DD-Waasser bei 25°C verdënnt goufen. Morphologie a Gréisstverdeelung goufen mat engem Hitachi H7600 Transmissiounselektronemikroskop (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japan) charakteriséiert, an d'Biller goufen duerno mat der Hitachi-Bildgebungssoftware (Hitachi, Tokyo, Japan) analyséiert. Fir d'Enkapsulatiounseffizienz (EE) an d'Ladekapazitéit (LC) vun Insulin-NPs ze bewäerten, goufen d'NPs an Ultrafiltratiounsréier mat engem Molekulargewiichtsgrenzwert vun 100 kDa pipettéiert an 30 Minutte laang bei 500 xg zentrifugéiert. Net-enkapselt Insulin am Filtrat gouf mat engem Agilent 1100 Serie HPLC System (Agilent, Santa Clara, Kalifornien, USA) quantifizéiert, deen aus enger quaternärer Pompel, engem Autosampler, engem Kolonneheizung an engem DAD besteet. Detektor. Insulin gouf mat enger C18 Kolonn (Zorbax, 3,5 μm, 4,6 mm × 150 mm, Agilent, USA) analyséiert an bei 214 nm detektéiert. Déi mobil Phas war Acetonitril a Waasser, mat 0,1% TFA, Gradientverhältnisser vun 10/90 bis 100/0, a gouf 10 Minutte laang lafe gelooss. Déi mobil Phas gouf mat enger Duerchflussquote vun 1,0 ml/min gepompelt. D'Kolonntemperatur gouf op 20 °C agestallt. Berechent d'Prozentsätz vun EE an LC mat Hëllef vun den Equatiounen (1) an der Equatioun (2).
Verschidde CS/Insulin-Verhältnisser tëscht 2,0 an 4,0 goufen getest fir den Insulin-NP z'optimiséieren. Verschidde Quantitéite vun der CS-Léisung goufen während der Virbereedung bäigefüügt, während d'Insulin/TPP-Mëschung konstant gehale gouf. Insulin-NPs goufen am pH-Beräich vu 4,0 bis 6,5 preparéiert andeems de pH-Wäert vun der Mëschung suergfälteg kontrolléiert gouf nodeems all Léisungen (Insulin, TPP a CS) bäigefüügt goufen. Den EE an d'Partikelgréisst vun den Insulin-Nanopartikel goufen bei verschiddene pH-Wäerter a CS/Insulin-Massverhältnisser evaluéiert fir d'Bildung vun Insulin-NPs z'optimiséieren.
Déi optiméiert Insulin-NPs goufen op den Aluminiumbehälter placéiert a mat Tissu bedeckt, déi mat Klebeband festgehalen goufen. Duerno goufen déi geschrauft Behälter an en Labconco FreeZone Gefriertrockner (Labconco, Kansas City, MO, USA) placéiert, deen mat engem Schachtrockner ausgestatt war. D'Temperatur an den Vakuumdrock goufen op -10 °C, 0,350 Torr fir déi éischt 2 Stonnen, an 0 °C an 0,120 Torr fir déi reschtlech 22 Stonnen vun den 24 Stonnen agestallt, fir dréchen Insulin-NPs ze kréien.
De Buchi Mini Spray Dryer B-290 (BÜCHI, Flawil, Schwäiz) gouf benotzt fir enkapselt Insulin ze generéieren. Déi gewielte Trocknungsparameter waren: Temperatur 100 °C, Zufuhrduerchfluss 3 L/min a Gasduerchfluss 4 L/min.
Insulin-NPs virun an no der Dehydratioun goufen mat Hëllef vun der FTIR-ATR-Spektroskopie charakteriséiert. Dehydratéiert Nanopartikelen, souwéi fräit Insulin a Chitosan goufen mat engem Spectrum 100 FTIR-Spektrophotometer (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) analyséiert, deen mat engem universellen ATR-Sampling-Accessoire (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) ausgestatt ass. Signalduerchschnëttswäerter goufen aus 16 Scans mat enger Opléisung vu 4 cm2 am Frequenzberäich vu 4000-600 cm2 kritt.
D'Morphologie vun dréchenen Insulin-NPs gouf duerch SEM-Biller vu gefriergedréchenten an sprëtzgedréchenten Insulin-NPs bewäert, déi mat engem Helios NanoLab 650 Focused Ion Beam-Scanning Electron Microscope (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA) opgeholl goufen. Den Haaptparameter, deen benotzt gouf, war eng Spannung vun 5 keV an e Stroum vun 30 mA.
All dehydréiert Insulin-NPs goufen an dd-Waasser nei opgeléist. D'Partikelgréisst, PDI, EE an LC goufen nach eng Kéier mat der selwechter Method getest, déi virdru scho beschriwwe gouf, fir hir Qualitéit no der Dehydratioun ze bewäerten. D'Stabilitéit vun den Anhydroinsulin-NPs gouf och gemooss andeems d'Eegeschafte vun den NPs no längerer Lagerung getest goufen. An dëser Studie goufen all NPs no der Dehydratioun fir dräi Méint am Frigo gelagert. No dräi Méint Lagerung goufen d'NPs op morphologesch Partikelgréisst, PDI, EE an LC getest.
Léist 5 ml vun de rekonstituéierten NPs an 45 ml mat simuléierter Magenflëssegkeet (pH 1,2, mat 1% Pepsin), Darmflëssegkeet (pH 6,8, mat 1% Trypsin) oder Chymotrypsin-Léisung (100 g/ml, a Phosphatpuffer, pH 7,8) op, fir d'Effizienz vum Insulin beim Schutz vun NPs no Dehydratioun ze evaluéieren. Si goufen bei 37°C mat enger Rührgeschwindegkeet vun 100 rpm inkubéiert. 500 μL vun der Léisung goufen zu verschiddenen Zäitpunkten gesammelt an d'Insulinkonzentratioun gouf duerch HPLC bestëmmt.
D'In-vitro-Fräisetzungsverhalen vu frësch preparéierten an dehydratiséierten Insulin-NPs gouf mat der Dialysebeutelmethod getest (Molekulargewiichtsgrenz 100 kDa, Spectra Por Inc.). Frësch preparéiert an rekonstituéiert dréchen NPs goufen a Flëssegkeeten bei pH 2,5, pH 6,6 a pH 7,0 (0,1 M Phosphat-gepuffert Salzléisung, PBS) dialyséiert fir d'pH-Ëmfeld vum Mo, Zwölffingerdarm an ieweschten Dünndarm ze simuléieren. All Prouwe goufen bei 37 °C mat stännegem Schüttelen bei 200 rpm inkubéiert. D'Flëssegkeet ausserhalb vum 5 ml Dialysebeutel zu de folgende Zäiten aspiréieren: 0,5, 1, 2, 3, 4 a 6 Stonnen, a fëllt de Volume direkt mat frëschem Dialysat op. D'Insulinkontaminatioun an der Flëssegkeet gouf duerch HPLC analyséiert, an d'Rate vun der Insulinfräisetzung aus den Nanopartikelen gouf aus dem Verhältnes vum fräie fräigesaten Insulin zum gesamten Insulin, deen an den Nanopartikelen agekapselt ass, berechent (Equatioun 3).
Mënschlech hepatozellulär Karzinomzell-Linn HepG2 Zellen goufen a Schosselen mat engem Duerchmiesser vu 60 mm mat Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) ugebaut, deen 10% fetalt Rinderserum, 100 IU/mL Penicillin an 100 μg/mL Streptomycin29 enthält. D'Kulture goufen bei 37°C, 95% relativer Loftfiichtegkeet a 5% CO2 gehalen. Fir d'Uptake-Tests goufen HepG2 Zellen mat 1 × 105 Zellen/ml op en 8-Well Nunc Lab-Tek Kammer-Slide-System (Thermo Fisher, NY, USA) ausgesaat. Fir Zytotoxizitéitstester goufen se a 96-Well-Platten (Corning, NY, USA) mat enger Dicht vu 5 × 104 Zellen/ml ausgesaat.
Den MTT-Assay gouf benotzt fir d'Zytotoxizitéit vu frësch preparéierten an dehydratiséierten Insulin-NPs30 ze evaluéieren. HepG2-Zellen goufen a 96-Well-Platten mat enger Dicht vu 5 × 104 Zellen/ml ausgesaat a 7 Deeg virum Test kultivéiert. Insulin-NPs goufen a verschiddene Konzentratioune (50 bis 500 μg/ml) am Kulturmedium verdënnt an duerno un d'Zellen verabreicht. No 24 Stonnen Inkubatioun goufen d'Zellen 3-mol mat PBS gewäsch an mat engem Medium mat 0,5 mg/ml MTT fir weider 4 Stonnen inkubéiert. D'Zytotoxizitéit gouf bewäert andeems d'enzymatesch Reduktioun vu gielem Tetrazolium-MTT zu violette Formazan bei 570 nm mat engem Tecan infinite M200 pro Spektrophotometer-Plattelieser (Tecan, Männedorf, Schwäiz) gemooss gouf.
D'Effizienz vun der Zellopnahm vun NPs gouf duerch konfokal Laser-Scanning-Mikroskopie a Flowcytometrie-Analyse getest. All Lach vum Nunc Lab-Tek Kammer-Slide-System gouf mat fräiem FITC-Insulin, FITC-Insulin-belaaschte NPs behandelt, an 25 μg/mL vun dehydratiséierten FITC-Insulin NPs an der selwechter Konzentratioun rekonstituéiert an 4 Stonnen inkubéiert. D'Zellen goufen 3-mol mat PBS gewäsch a mat 4% Paraformaldehyd fixéiert. D'Käre goufen mat 4',6-Diamidino-2-phenylindol (DAPI) gefierft. D'Insulin-Lokaliséierung gouf mat engem Olympus FV1000 Laser-Scanning/Zwei-Photon-Konfokalmikroskop (Olympus, Shinjuku City, Tokyo, Japan) observéiert. Fir d'Flowcytometrie-Analyse goufen déiselwecht Konzentratioune vun 10 μg/mL fräiem FITC-Insulin, FITC-Insulin-belaaschte NPs an nei opgeléiste dehydratiséierten FITC-Insulin NPs zu 96-Lach-Platten bäigefüügt, déi mat HepG2-Zellen ausgesaat goufen, an 4 Stonnen inkubéiert. Stonnen. No 4 Stonnen Inkubatioun goufen d'Zellen erausgeholl an 3-mol mat FBS gewäsch. 5 × 104 Zellen pro Prouf goufen mat engem BD LSR II Flowcytometer (BD, Franklin Lakes, New Jersey, Vereenegt Staaten) analyséiert.
All Wäerter ginn als Moyenne ± Standardofwäichung ausgedréckt. Vergläicher tëscht alle Gruppen goufen mat Hëllef vun enger One-Way-ANOVA oder engem t-Test vun IBM SPSS Statistics 26 fir Mac (IBM, Endicott, New York, USA) evaluéiert, a p < 0,05 gouf als statistesch signifikant ugesinn.
Dës Studie weist d'Flexibilitéit an d'Fäegkeet vum Sprëtztrocknen, fir vernetzt Chitosan/TPP/Insulin-Nanopartikelen mat enger besserer Rekonstitutioun ze dehydratéieren am Verglach mat Standard-Gefriertrocknungsmethoden, déi Füllmëttel oder Kryoprotektiounskapazitéit a méi héijer Ladekapazitéit benotzen. Déi optiméiert Insulin-Nanopartikelen hunn eng duerchschnëttlech Partikelgréisst vun 318 nm an eng Kapselungseffizienz vun 99,4% erginn. SEM- an FTIR-Resultater no der Dehydratioun hunn gewisen, datt d'Sphärstruktur nëmmen a sprëtztrocknenen NPs mat an ouni Mannitol a lyophiliséierte mat Mannitol erhale bliwwen ass, awer lyophiliséiert NPs ouni Mannitol goufen während der Dehydratioun zersetzt. Am Rekonstitutiounsfäegkeetstest hunn Insulin-Nanopartikelen, déi ouni Mannitol sprëtztrocknen, déi klengst duerchschnëttlech Partikelgréisst an déi héchst Lade bei der Rekonstitutioun gewisen. D'Fräisetzungsverhalen vun all dësen dehydratiséierten NPs hunn gewisen, datt se séier a Léisunge vu pH = 2,5 a pH = 7 fräigesat goufen, a ganz stabil a Léisunge vu pH = 6,5 waren. Am Verglach mat anere nei opgeléisten dehydratiséierten NPs hunn d'NPs... Sprühgedréchent ouni Mannitol huet déi séierst Fräisetzung gewisen. Dëst Resultat entsprécht deem, wat am Zellopnahmtest observéiert gouf, well Sprühgedréchent NPs ouni Mannitol d'Effizienz vun der Zellopnahm vu frësch preparéierten NPs bal komplett bäibehalen hunn. Dës Resultater suggeréieren, datt dréchen Insulin-Nanopartikelen, déi duerch Mannitolfräi Sprühdréchnung preparéiert ginn, am beschte fir d'weider Veraarbechtung an aner wasserfräi Doséierungsformen, wéi z. B. oral Tabletten oder bioadhäsiv Filmer, gëeegent sinn.
Wéinst Problemer mam intellektuellen Eegentum sinn d'Datensätz, déi während der aktueller Studie generéiert an/oder analyséiert goufen, net ëffentlech verfügbar, awer si kënnen op Ufro vun de jeeweilegen Autoren zur Verfügung gestallt ginn.
Kagan, A. Typ 2 Diabetis: sozial a wëssenschaftlech Urspronk, medizinesch Komplikatiounen an Implikatioune fir Patienten an anerer. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. D'Entwécklung vun der Insulinkapselung: ass eng oral Verwaltung elo méiglech? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Rezent Fortschrëtter bei oralen Insulin-belaaschte Liposomen-Liwwersystemer fir d'Behandlung vun Diabetis. Interpretation. J. Pharmacy. 549, 201–217 (2018).